mediomics：Bridge-It PDE檢測(cè)試劑盒：Bridge-It® cAMP-磷酸二酯酶 (PDE) 檢測(cè)試劑盒，96 孔格式 

Bridge-It® cAMP 磷酸二酯酶 (PDE) 測(cè)定是一種基于熒光的高通量篩選 (HTS) 方法，用于測(cè)量純化來(lái)源的環(huán)核苷酸磷酸二酯酶活性并確定其抑制劑的 IC 50。該測(cè)定基于 Bridge-It® cAMP 多合一熒光測(cè)定（Mediomics，目錄號(hào) 122938）的形式。

應(yīng)用：

• PDE相關(guān)藥物發(fā)現(xiàn)項(xiàng)目

• 心、肺（即COPD）、血小板功能和炎癥機(jī)制的研究

• 焦慮癥或神經(jīng)退行性疾病的研究

特征：

• 簡(jiǎn)單： 將測(cè)試樣品或標(biāo)準(zhǔn)品與測(cè)定溶液混合并在 ~25°C 下孵育

• 快速： 孵育 30 分鐘后讀取熒光信號(hào)

• 靈活： 檢測(cè)方法適用于低通量和高通量篩選形式

cAMP、PDE 和 Bridge-It 熒光測(cè)定的背景信息

3',5'-環(huán)單磷酸腺苷 (cAMP)

3',5'-環(huán)單磷酸腺苷 (cAMP) 是重要的第二信使，參與多種生物過(guò)程的調(diào)節(jié)。 cAMP 的測(cè)量在新藥發(fā)現(xiàn)中尤其重要，因?yàn)?cAMP 水平與新藥發(fā)現(xiàn)的主要靶標(biāo)之一——G 蛋白偶聯(lián)受體 (GPCR) 的活性密切相關(guān)。用于測(cè)定 cAMP 濃度的 Mediomics 熒光 cAMP 測(cè)定方法基于上述測(cè)定平臺(tái)設(shè)計(jì)。 CAP 是一種細(xì)菌 DNA 結(jié)合蛋白，其 DNA 結(jié)合活性取決于 cAMP 的存在，被用作測(cè)量 cAMP 水平的高度特異性生物傳感器。當(dāng) PDE 將 cAMP 水解為 AMP 時(shí)，cAMP 濃度降低，從而導(dǎo)致 CAP-DNA 復(fù)合物形成減少，并與探針形成更多游離“半位點(diǎn)"雙鏈體（未猝滅）。熒光信號(hào)的增加與 PDE 活性成正比。

Bridge-It® PDE 檢測(cè) – cAMP 標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)

以下 cAMP 標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)代表使用 Bridge-It® PDE 測(cè)定法制備的曲線(xiàn)。它顯示了在 384 孔板中的緩沖液 B 中制備的標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，并在添加 2X 檢測(cè)溶液 30 分鐘、1 小時(shí)和 2 小時(shí)后讀取熒光信號(hào)。

Bridge-It® PDE 檢測(cè) – PDE 活性檢測(cè)

以下 PDE 活性測(cè)定是使用 Bridge-It® PDE 測(cè)定制備的代表性測(cè)定。相對(duì)活性是在含有指示量的牛腦 PDE 的樣品中測(cè)量的（Sigma，St. Louis，MO，目錄號(hào) P9529）。將反應(yīng)在室溫下溫育30分鐘并通過(guò)添加0.5ul終止溶液來(lái)終止。添加 2X 測(cè)定溶液，并在室溫下孵育 40 分鐘后讀取信號(hào)。

Bridge-It® PDE 測(cè)定 – IC 50測(cè)定

以下測(cè)定是使用 Bridge-It® PDE 測(cè)定制備的代表性測(cè)定。使用來(lái)自牛腦的 0.8 mU PDE（Sigma，St. Louis，MO，Cat# P9529）和一定量的 IBMX（Sigma，St. Louis，MO）測(cè)量樣品的相對(duì)活性。

注意：RA（相對(duì)活性）的定義位于協(xié)議第 8 頁(yè)。 PDE 測(cè)定在標(biāo)準(zhǔn) 384 孔板中進(jìn)行，最終 10 ul 反應(yīng)液含有 1 x PDE 反應(yīng)緩沖液（25 mM Tris，pH 7.4，100 mM NaCl，BSA 0.1 mg/ml，CaCl2 0.03 mM，鈣調(diào)蛋白（Sigma， St. Louis, MO, Cat# P1431) 10 U/ml)，含有來(lái)自牛腦的 0.8 mU PDE (Sigma, St. Louis, MO, Cat# P9529) 和一定量的 IBMX (Sigma, St. Louis, MO) ）。將酶和 IBMX 混合并在室溫下預(yù)溫育 5 分鐘。添加6 pmole cAMP，并將反應(yīng)在室溫下溫育30分鐘，并通過(guò)添加0.5ul終止溶液來(lái)終止。添加 2X 測(cè)定溶液，并在室溫下孵育 40 分鐘后讀取信號(hào)。

研究用途： 僅供研究使用，不可用于診斷程序。

mediomics：Bridge-It PDE檢測(cè)試劑盒